人们试图寻找有效的消除剂，把耐药质粒（R质粒）从宿主菌株中消除掉，使其重新恢复对抗生素的敏感性，复方中成药克痢痧用于治疗腹泻与细菌性痢疾，本实验以克痢痧作为R质粒消除剂，研究其对致病性大肠埃希菌R质粒的消除作用，并与传统R质粒消除剂十二烷基硫酸钠（SDS）和盐酸小檗碱作对比研究。

1.资料与方法

1.1材料

2株致病性医院检验科细菌室分离的临床菌株，经检测均对庆大霉素、氨苄西林耐药。)Gm、Ap、盐酸小檗碱均系国产标准品，溴化乙锭、SDS均为进口分装，购自华美公司。营养琼脂和营养肉汤均为杭州微物试剂有限公司产品，批号分别为、。克痢痧胶囊由浙江可立思安制药有限公司提供，成份为白芷、苍术、石菖蒲、细辛、荜茇、鹅不食草、猪牙皂、丁香、硝石、白矾、雄黄、冰片。批准号：国药准字Z，生产批号：。

1.2方法

1.2.1质粒消除试验

将致病性大肠埃希菌E菌株接种于肉汤培养基中，经37°C、24h培养，取1ml分别加入含不同浓度克痢痧的肉汤培养基中。肉汤培养基中克痢痧浓度自12.5mg/ml始起，采用几何级数稀释法，每管肉汤培养基量为5ml，37°C培养24h，观察细菌生长现象，判定克痢痧的亚抑菌浓度（2.1mg/ml）。从亚抑菌浓度管中取50ul菌液分别划种于10块含克痢痧（2.1mg/ml）琼脂平板培养基上，经37°C、24h培养，分别编号挑选个单个菌落，以影印培养法依次转种于含Gm（0.25mg/ml）、AP（0.1mg/ml）的药物平板培养基上以及不含药物的营养琼脂平板培养基上作对照，经37°C培养24h，观察并记录结果。

1.2.2R质粒消除子的筛选与鉴定

选择以上在含Gm和AP的平板培养基上不生长，而在不含Gm和AP普通平板培养基上生长的菌落，再经用含Gm和AP选择平板培养基复试加以确认，即为R质粒消除子，并计算出质粒消除率。将消除子转种于5ml(营养肉汤培养基中，经37°C振荡培养48h，以碱裂解法快速抽提质粒DNA，1%琼脂糖电泳、EB染色，紫外投射仪检测凝胶分析系统摄像分析质粒消除情况。

1.2.3对照试验

选用传统消质剂SDS和盐酸小檗碱。SDS亚抑菌浓度的确定参见文献，经计算得0.%SDS营养肉汤和营养琼脂，盐酸小檗碱经测亚抑菌浓度为0.mg/ml，其检测方法同上。同时，还以不经任何消质剂处理作空白对照试验。

1.3统计学处理采用X2检验。

2.结果

2.1R质粒消除率

用克痢痧、盐酸小檗碱、SDS作为消质剂及未经任何消质剂处理的空白对照试验，对Gm耐药性的质粒消除率分别为14.75%、14.72%、33.40%、0.05%，但SDS消质率要显著高于克痢痧和盐酸小檗碱（P＜0.01)；对氨苄青西林耐药性的质粒消除率分别为7.59%、6.82%、7.56%、0.07%（P＞0.05)，见表1。

2.2R质粒消除结果

用克痢痧及SDS、盐酸小檗碱作为消质剂进行质粒消除前后质粒图谱的比较见图1。可见经克痢痧和SDS、盐酸小檗碱作用后，致病性大肠埃希菌均都丢失1至数条质粒带。

3.讨论

R质粒即细菌耐药性基因常常赋予宿主菌对多种抗生素产生耐药性。随着广谱抗生素的广泛应用，药物敏感菌株受到抑制或杀灭，使带有R质粒的耐药株大量增加，为临床治疗带来困难。目前，国内外对中草药进行了大量的抑菌作用的筛选，本实验结果证明，复方克痢痧的成分不仅有一定的抑菌作用，而且有一定的质粒消除作用。本文表明，经克痢痧作用后，原菌株染色体及7条质粒带清晰可见，而消除子都缺失了相应的质粒带，表明致病性大肠埃希菌耐药性的丢失是由于编码此种耐药性质粒受克痢痧的作用而消除。并且，对耐AP的致病性大肠埃希菌，克痢痧与SDS、盐酸小檗碱三者基本相似（P＞0.05)种消质剂与空白对照相比均具有显著性差异（P＜0.01)。对耐Gm的致病性大肠埃希菌，采用各消质剂的亚抑菌浓度来测定，克痢痧与盐酸小檗碱基本相似（P＞0.05)，但SDS消除率显著高于克痢痧与盐酸小檗碱（P＜0.01)，同样3种消质粒消除剂与空白对照相比差异有显著性（P＜0.01)。我们研究结果表明：克痢痧对耐药性菌株R质粒有明显的消质作用，提示临床在抗感染治疗中克痢痧与抗生素联合用药可减少菌株产生耐药性。本研究是采用克痢痧体外实验，在体内能否达到与体外相同效果，有待进一步研究。